Extração do DNA da banana !

A cromatina é formada por moléculas de DNA ( polímeros de desoxi-ribonucleotídeos fosfatados) associadas à proteínas, localizada no núcleo das células. Para a extração de DNA, é necessário que ocorra a lise das membranas plasmáticas e nucleadas, remoção das proteínas e isolamento do DNA purificado.

Em geral, as proteínas transmembrana só podem ser solubilizadas por agentes que rompa associações hidrofóbicas e destruam a bicamada lipídica. Entre esses, os mais úteis para o bioquímico que estuda membranas são detergentes, os quais são moléculas anfipáticas que tendem a formar micelas em água. Quando misturados com membranas, as extremidades hidrofóbicas dos detergentes ligam-se às regiões hidrofóbicas das proteínas das membranas, deslocando as moléculas lipídicas. Como a outra extremidade da molécula de detergente é polar, esse ligação tende a solubilizar as proteínas da membrana como complexos de detergentes-proteína. Com detergentes iônicos fortes, mesmo as proteínas de membrana mais hidrofóbicas podem ser solubilizadas.

A molécula de DNA não é solúvel em álcool e desta maneira tende a formar um aglomerado de moléculas quando em meio alcóolico. 

Atividade 1 – Extração de DNA de células de banana. 

MATERIAL:

1 banana ,Estilete ,NaCl (sal de cozinha) ,Detergente ,Água destilada ,Álcool etílico á 95% gelado ,Pipeta Pasteur

Tudo de ensaio ,Banho-maria a 60C° ,Proveta 100ml ,Erlenmeyer de 100ml ,Placa de Petri pequena , Filtro de papel

METODOLOGIA:

1 Picar em pedaços bem pequenos ou triturar cerca de 1/4 de uma banana em placa de Petri utilizando o bisturi.

2 Preparar a solução de estração em um elenmeyer, misturar 5 ml de detergente, 1g de sal de cozinha e complementar até 50 ml de água destilada.

3 Adicione a banana triturada, misture e coloque 7 ml de solução em um tubo de ensaio. Colocar o tubo em banho-maria a 60C° por 30 mim.

4 Resfriar rapidamente a solução colocando-a num recepiente com gelo e mexendo cuidadosamente.

5 Coar a mistura em filtro de papel, transferindo 7 ml da solução para o tubo de ensaio limpo.

6 Adicionar a solução 7 ml de álcool etílico á  95% vagarosamente.

7 Inverter o tubo com cuidado até o surgimento do DNA precipitado.